實（shí）驗室微生物實驗（yàn）必知的培養（yǎng）製（zhì）備技術匯總

　　一、要樹立（lì）科學（xué）必須真實的觀念（niàn），實驗態度要端正。

　　要懷著一顆為了出具真（zhēn）實（shí）、準確，可信數據而敬畏的心去（qù）申請能力驗證。

　　實驗要求科學嚴謹（jǐn）,實驗要預先充分練習和實踐（jiàn）。能力驗證是對實驗室綜（zōng）合實驗（yàn）水平（人員，設備，環境等多因素（sù））的評（píng）價。

　　首先要選好實（shí）驗項目，找到與之配套的方法（fǎ），進行充分的方法驗證，從檢測員（yuán）能力（lì），儀器設備性能，校檢結果是（shì）否能（néng）滿足實驗需要，實驗檢測多次實驗（yàn），檢測（cè）環境是否（fǒu）進行（háng）了充分的（de）考慮，實驗確（què）認好實驗項目，認真學習（xí）標準，理解標準，並做到標準所規範的步驟，並對自己實驗有了一定的信心後再去申請能力（lì）驗證為宜。

　　舉例：某實驗（yàn）室未經過充分實驗方法確認，實驗平（píng）時做的也少，直接申請了能力驗證（zhèng）。實驗過程（chéng）生疏，照方抓藥，手忙腳亂，造成稀釋梯度不夠，平板（bǎn）幹燥，菌落蔓延，無法出具具體數值，實驗失敗。

　　二、實驗室收到盲樣菌株標本後，首先應做的事情（qíng）利用集菌儀或者微生（shēng）物檢查儀製備樣品（pǐn）。

　　1、檢查標本的（de）性狀和確認包裝情況，然後按照（zhào）要求去能力驗證網站提交收到樣品（pǐn）情況。

　　2、仔細閱讀參（cān）指導書，包括標本如何保（bǎo）存的信息，進行實驗室內部工作分配，明（míng）確工作任務和要求。

　　3、實驗前應嚴格按照作業指導書的要求製訂（dìng）檢驗流程，認真（zhēn）做好（hǎo）準備工作，包括實驗（yàn）中需要使用的（de）器皿，須提前做好清潔滅菌（jun1）。

　　三、能力驗證（zhèng）樣品處理。

　　1、定量項目，西林瓶內樣品不可分割，應全部用於檢測。一（yī）般參考書指（zhǐ）導的是加40mL稀釋液製成40mL樣品。

　　2、定量項目樣品稀釋。指導書標明了稀釋範（fàn）圍的，在稀釋範圍左右各加1個稀（xī）釋（shì）度進行；書上沒有稀（xī）釋範圍的，多做稀釋倍數，選擇合適的稀釋（shì）倍數計數（一（yī）般可稀釋至10-8）。

　　3、定量項（xiàng）目，除了要多（duō）做稀釋倍數外，同時同一稀釋度要多倒（dǎo）幾皿，從原理上來講，檢測過程（chéng）屬於隨（suí）機抽樣檢查，平板越多，數據（jù）越接近真值。考慮性價比，又不可能一直瘋（fēng）狂一個（gè）稀（xī）釋度很多平板，所以能力驗（yàn）證時候多倒幾皿，求好結果。

　　4、定性項目（mù）有一些重（chóng）要步（bù）驟。

　　a、增菌及分離步驟尤其重要。選擇合適（shì）的增菌液和分（fèn）離用培養基對目標菌的檢出非常關鍵，選擇兩種以上的增菌液和分離用培養基（jī）對菌株作直接分（fèn）離和增菌後分離。

　　b、劃線分離十分重要，要把增菌液中的目標菌盡量多的表達出來，要分出單個菌落並盡可能多挑取可疑（yí）菌落，確保分離到目標菌。

　　c、生化（huà）試驗和血清學試驗以營養瓊脂平板上的純（chún）培養（yǎng）細菌為（wéi）好。

　　四、實驗過程一定要做（zuò）陰陽對（duì）照，全程空白（bái）對照。

　　再厲害的高手也有失手（shǒu）和看走眼的時候，所以陰陽對照就是一麵鏡子。對於一（yī）些熒光染色後進行判讀的實驗顯得尤為重要。

　　這裏掃盲一個誤區，定量計數（shù）測菌數（shù）時，麻豆免费视频會認為（wéi）空白就是直（zhí）接取1mL無菌水然後（hòu）加入（rù）到（dào）平板裏，然後混菌倒（dǎo）皿，這是錯誤的。因為這樣做的話，隻能（néng）模擬（nǐ）證明（míng）稀釋後倒平板這一步有沒有汙染。而無法證明從樣品稱取-樣品稀（xī）釋時候的汙染質控情（qíng）況。所以要做全程空白對照。

　　全程空白（bái）的含（hán）義就是把無菌液（yè）當成樣品，然後走一遍實驗過程。如果嚴格這麽做的話，又會走向（xiàng）另一個極端，所以全程空白隻從取樣開始至稀釋10-1做了簡化，而不（bú）做後續稀釋空白樣的混菌實驗。

　　在有些其他實驗時候，會有樣品空白以及稀釋液空白，比如大氣環境NOx和SO2的檢測，有興趣的可以去看看，對於全（quán）程空白（bái）的意義理解（jiě）有（yǒu）更好的幫（bāng）助。

　　五、培（péi）養基方麵需要注意的地方。

　　1、培（péi）養基（jī）配製充分混勻後再滅菌。

　　正確做法是用一部分水攪拌均（jun1）勻後，再加入剩餘（yú）水量（liàng），混勻後滅菌或分裝。

　　2、混菌法倒皿要充分混勻。

　　培養基（jī）倒完要左5圈右5圈（quān）（混勻速度（dù）一定要慢，目的是——避免培養基波動到二皿接觸的縫隙部分造成（chéng）後續（xù）汙染），找較水平位置冷卻凝固。

　　3、微生物限度過濾結束後培養基（jī）要（yào）不要覆蓋問（wèn）題。

　　覆蓋的目的是為了阻止活菌在培養基表層通過（guò）鞭毛移動，造成片狀（zhuàng）生長，無法計數這一（yī）不利現象的發生。這裏可以發揮主觀能動性-對於不運動的（de）菌，可以（yǐ）不覆蓋，對於運動的菌（jun1）覆蓋。

　　總結一下：

　　a長期檢測同一種樣品，不（bú）覆蓋並無蔓延現象，不覆蓋；長期檢測蔓延（yán）選擇了覆蓋，一直覆（fù）蓋。

　　b未知樣品，進行覆蓋和不覆蓋（gài）的比對實驗，然後決定以後同樣的樣品（pǐn）是否需要覆蓋（gài）。養成經驗。

　　c能力驗證（zhèng）實驗（yàn），覆（fù）蓋和不覆蓋的都做，不要吝惜那麽一點點培養基或耗材，畢竟能力驗證（zhèng）實驗做的漂亮才是實驗室（是室而不是人！）能力的綜合體現。

　　4、培養過程防（fáng）止平皿幹燥。

　　培養過程中培養（yǎng）基可以倒的適當厚一些，比如25mL。培養箱底部接一個不鏽鋼盆，裝上足量無菌水（沒有就去（qù）買幾瓶什麽的水倒裏麵）。

　　5、培養完成要保留實（shí）驗平（píng）皿和其他相關材料。

　　作（zuò）為能力驗（yàn）證，原始記（jì）錄及實驗報告還（hái）沒出具完成，各種材料還是（shì）保留至（zhì）數據出具後較好，便於出現問（wèn）題（tí）現查原因，馬上（shàng）補救。

　　題外話：很多檢測員等結果（guǒ）出（chū）了問題（tí）然後到網絡上來求救，結果一問平皿已經（jīng）洗掉了，那就不知（zhī）道是什麽狀況了。有時候你問她她還會振振有詞的講：10-1，10-2都蔓延了，不洗掉幹嘛，10-5，10-6沒長菌，不洗掉幹嘛？我（wǒ）當（dāng）時真的（de）無語（yǔ），也不想多說（shuō）話就沒繼續講了。現在我（wǒ）回答（dá）一下這個問題：我要你一套完整梯度濃度的（de）平皿，可以看出你10倍稀釋梯度是不是穩定，還有蔓延是個（gè）什麽狀況（kuàng），到底有多少，是一片還是局部（bù）還是很小一部分（fèn），然（rán）後根據（jù）整體數據估算結果（當（dāng）然實驗做成這樣也基本算失敗了，因為實驗沒有做到你（nǐ）可控的範（fàn）圍（wéi）），是補救的一種（並不可取，屬於（yú）垂（chuí）死（sǐ）掙紮）。定量實驗時，當天做完的稀釋樣品也要放冰箱裏，雖然實驗要求不能複檢或重複檢測，但（dàn）作（zuò）為微生物專業你是知道菌放（fàng）在2-8℃下並不會長多（duō）少，如果第二天一看數據有蔓延或疑（yí）問，馬上再做一次，這樣也應該在誤差範圍內出數。

　　6、實（shí）驗培養過程勤觀察。

　　微生物培養過程一般需要幾（jǐ）小時到幾十小時，要（yào）利用（yòng）這段時間（jiān）觀察培養箱及菌生長情況，比如溫度是否（fǒu）穩定（dìng），培養室內（nèi）濕度如何等等，多思多看，準備預案。方有可能得到與盲樣一致的實驗結果。

　　原始（shǐ）記錄應有條理、思路清晰,完整準確地記（jì）錄菌株鑒定檢驗的全過程,原始記錄要包含時間、試驗現象、試驗結果三個（gè）要素，方便試（shì）驗（yàn）出現問題的查（chá）找。